熒光PCR凍干-DTT

二硫蘇糖醇（簡(jiǎn)稱為DTT）是一種小分子有機(jī)還原劑，其還原狀態(tài)下為線性分子。DTT有什么特點(diǎn)？怎么保存呢？DTT是一種常用還原劑，有抗氧化作用，進(jìn)口分裝。DTT和巰基乙醇相比， DTT的刺激性氣味要小很多，毒性也比巰基乙醇低很多。另外DTT比巰基乙醇的濃度低7倍時(shí)，兩者效果相近。DTT一般保存條件為-20℃保存。1M DTT溶液可以在-20℃保存2年以上。由于容易被空氣氧化， DTT的穩(wěn)定性較差;但冷凍保存或在惰性氣體中處理能夠延長(zhǎng)它的使用壽命。DTT作為PCR的添加劑與DMSO、甜菜堿、BSA混合配制成的復(fù)合型添加劑，按照一定比例配比，能獲得PCR擴(kuò)增特異性和很高的PCR擴(kuò)增產(chǎn)量。PCR的擴(kuò)增反應(yīng)并不是可以無(wú)窮地進(jìn)行下去的，經(jīng)過(guò)一定的循環(huán)周期后需擴(kuò)增的片段不再按指數(shù)增多而逐漸進(jìn)入平坡；進(jìn)入平坡的循環(huán)次數(shù)，取決于起始時(shí)存在的模板拷貝數(shù)以及合成的DNA總量。所謂平坡就是批PCR循環(huán)的后期，合成產(chǎn)物達(dá)0.3～1pmol時(shí)，由于產(chǎn)物的堆積，使原來(lái)以指數(shù)增加的速率變成平坦的曲線。

試劑凍干機(jī)Pilot3-6T應(yīng)用示例（熒光PCR凍干）：

1. 探針、底物、引物原料要求確定。
2. 凍干溶液配方開發(fā)，采用正交法或響應(yīng)曲面法進(jìn)行輔料篩選。
3. 選擇適合的包材和模具。
4. 設(shè)計(jì)凍干曲線配合輔料篩選。
5. 確定配方及工藝。
6. 穩(wěn)定性測(cè)試。
7. 根據(jù)穩(wěn)定性測(cè)試結(jié)果修正工藝或配方。
8. 整個(gè)環(huán)節(jié)注意環(huán)境、設(shè)備、人員的結(jié)合。